Desarrollo de vacunas terapéuticas con células dendríticas humanas para melanoma : optimización de parámetros fenotípicos y funcionales in vitro e in vivo de la vacuna experimental...

Autores
Pizzurro, Gabriela Andrea
Año de publicación
2016
Idioma
español castellano
Tipo de recurso
tesis doctoral
Estado
versión publicada
Colaborador/a o director/a de tesis
Mordoh, José
Barrio, María Marcela
Descripción
El presente trabajo de Tesis se centra principalmente en el estudio en profundidad y laoptimización del diseño de la vacuna experimental CD/Apo-Nec para el melanoma cutáneohumano, desarrollada previamente en nuestro laboratorio. En primer lugar, se caracterizó la interacción entre las células dendríticas y células demelanoma g-irradiadas (Apo-Nec) durante su co-cultivo. Luego de la detección de unincremento en los cuerpos lipídicos citoplasmáticos de las células Apo-Nec post-irradiación,se determinaron sus características bioquímicas y la dinámica de su formación. El desempeñode las células dendríticas fue evaluado en presencia de distinto contenido lipídico,caracterizando la fagocitosis, el cargado antigénico y su capacidad estimulatoria, en diferentesestados de maduración. Luego, se compararon características migratorias de la vacuna in vitro e in vivo endiferentes estados de maduración. Se describió la llegada de la vacuna a los ganglios linfáticosen ratones nude. Junto a la respuesta quemotáctica, se determinaron los factores del sistemaresponsables de la motilidad y distribución de la vacuna luego de su administración por víasubcutánea. Por último, se determinó el perfil inmunoestimulatorio de la vacuna, junto con sucapacidad de activar clones de células T antígeno-específicos en el tiempo. Se caracterizóademás la respuesta generada por la vacuna sobre linfocitos naïve, en cuanto a su activación ycapacidad proliferativa y citotóxica frente a células de melanoma. En resumen, el análisis de distintas variables presentes en las sucesivas etapas de lageneración de la vacuna CD/Apo-Nec permitió determinar condiciones que influyen y mejoransus características finales. Este diseño optimizado, el cual presenta claras evidencias de generaruna respuesta inmunitaria anti-tumoral eficaz, podrá ser evaluado con futuros estudios en laclínica.
The present PhD Thesis project is mainly focused on the thorough analysis of theexperimental DC/Apo-Nec vaccine for human cutaneous melanoma, in order to obtain anoptimized design of the vaccine previously developed in our laboratory. First, the interaction between dendritic cells and g-irradiated melanoma cells (Apo-Nec)was characterized during the co-culture. As an increase in the cytoplasmic lipid body formationwas detected in Apo-Nec cells after irradiation, a biochemical analysis and a description oftheir formation was performed. Dendritic cell function was assessed in the presence of differentlipid body content, analyzing phagocytosis, antigen loading and stimulating capacity, atdifferent maturation status. Then, the migratory pattern of the vaccine was analyzed and compared in vitro and invivo at different maturation status. Vaccine lymph node homing was described in the nudemouse model. Besides the chemotactic response, the main components responsible of vaccinemotility and distribution after subcutaneous administration were determined. Finally, the immunostimulatory profile of the vaccine was determined, along with itscapacity to activate antigen-specific T-cell clones at different times after co-culture. Thevaccine-induced response on naïve lymphocytes was also evaluated, regarding cell activation,proliferative response and cytotoxic function against melanoma cells. Altogether, the analysis of variables present during several stages of the DC/Apo-Necvaccine production and administration resulted in a more detailed and improved vaccinedesign. This optimized model has provided strong evidence that suggests it could generate anefficient anti-tumor immune response that should be further evaluated in the clinic.
Fil: Pizzurro, Gabriela Andrea. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.
Materia
INMUNOTERAPIA
CELULAS DENDRITICAS
MELANOMA
IRRADIACION GAMMA
CUERPOS LIPIDICOS
MIGRACION A GANGLIOS LINFATICOS
RESPUESTA INMUNITARIA ANTI-TUMORAL
IMMUNOTHERAPY
DENDRITIC CELLS
MELANOMA
GAMMA IRRADIATION
LIPID BODIES
LYMPH NODE HOMING
ANTI-TUMOR IMMUNE RESPONSE
Nivel de accesibilidad
acceso abierto
Condiciones de uso
https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar
Repositorio
Biblioteca Digital (UBA-FCEN)
Institución
Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
OAI Identificador
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En primer lugar, se caracterizó la interacción entre las células dendríticas y células demelanoma g-irradiadas (Apo-Nec) durante su co-cultivo. Luego de la detección de unincremento en los cuerpos lipídicos citoplasmáticos de las células Apo-Nec post-irradiación,se determinaron sus características bioquímicas y la dinámica de su formación. El desempeñode las células dendríticas fue evaluado en presencia de distinto contenido lipídico,caracterizando la fagocitosis, el cargado antigénico y su capacidad estimulatoria, en diferentesestados de maduración. Luego, se compararon características migratorias de la vacuna in vitro e in vivo endiferentes estados de maduración. Se describió la llegada de la vacuna a los ganglios linfáticosen ratones nude. Junto a la respuesta quemotáctica, se determinaron los factores del sistemaresponsables de la motilidad y distribución de la vacuna luego de su administración por víasubcutánea. Por último, se determinó el perfil inmunoestimulatorio de la vacuna, junto con sucapacidad de activar clones de células T antígeno-específicos en el tiempo. Se caracterizóademás la respuesta generada por la vacuna sobre linfocitos naïve, en cuanto a su activación ycapacidad proliferativa y citotóxica frente a células de melanoma. En resumen, el análisis de distintas variables presentes en las sucesivas etapas de lageneración de la vacuna CD/Apo-Nec permitió determinar condiciones que influyen y mejoransus características finales. Este diseño optimizado, el cual presenta claras evidencias de generaruna respuesta inmunitaria anti-tumoral eficaz, podrá ser evaluado con futuros estudios en laclínica.The present PhD Thesis project is mainly focused on the thorough analysis of theexperimental DC/Apo-Nec vaccine for human cutaneous melanoma, in order to obtain anoptimized design of the vaccine previously developed in our laboratory. First, the interaction between dendritic cells and g-irradiated melanoma cells (Apo-Nec)was characterized during the co-culture. As an increase in the cytoplasmic lipid body formationwas detected in Apo-Nec cells after irradiation, a biochemical analysis and a description oftheir formation was performed. Dendritic cell function was assessed in the presence of differentlipid body content, analyzing phagocytosis, antigen loading and stimulating capacity, atdifferent maturation status. Then, the migratory pattern of the vaccine was analyzed and compared in vitro and invivo at different maturation status. Vaccine lymph node homing was described in the nudemouse model. Besides the chemotactic response, the main components responsible of vaccinemotility and distribution after subcutaneous administration were determined. Finally, the immunostimulatory profile of the vaccine was determined, along with itscapacity to activate antigen-specific T-cell clones at different times after co-culture. Thevaccine-induced response on naïve lymphocytes was also evaluated, regarding cell activation,proliferative response and cytotoxic function against melanoma cells. Altogether, the analysis of variables present during several stages of the DC/Apo-Necvaccine production and administration resulted in a more detailed and improved vaccinedesign. This optimized model has provided strong evidence that suggests it could generate anefficient anti-tumor immune response that should be further evaluated in the clinic.Fil: Pizzurro, Gabriela Andrea. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y NaturalesMordoh, JoséBarrio, María Marcela2016-11-29info:eu-repo/semantics/doctoralThesisinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionhttp://purl.org/coar/resource_type/c_db06info:ar-repo/semantics/tesisDoctoralapplication/pdfhttps://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n6093_Pizzurrospainfo:eu-repo/semantics/openAccesshttps://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/arreponame:Biblioteca Digital (UBA-FCEN)instname:Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturalesinstacron:UBA-FCEN2026-10-15T10:54:53Ztesis:tesis_n6093_PizzurroInstitucionalhttps://digital.bl.fcen.uba.ar/Universidad públicaNo correspondehttps://digital.bl.fcen.uba.ar/cgi-bin/oaiserver.cgiana@bl.fcen.uba.arArgentinaNo correspondeNo correspondeNo correspondeopendoar:18962026-10-15 10:54:55.168Biblioteca Digital (UBA-FCEN) - Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturalesfalse
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The present PhD Thesis project is mainly focused on the thorough analysis of theexperimental DC/Apo-Nec vaccine for human cutaneous melanoma, in order to obtain anoptimized design of the vaccine previously developed in our laboratory. First, the interaction between dendritic cells and g-irradiated melanoma cells (Apo-Nec)was characterized during the co-culture. As an increase in the cytoplasmic lipid body formationwas detected in Apo-Nec cells after irradiation, a biochemical analysis and a description oftheir formation was performed. Dendritic cell function was assessed in the presence of differentlipid body content, analyzing phagocytosis, antigen loading and stimulating capacity, atdifferent maturation status. Then, the migratory pattern of the vaccine was analyzed and compared in vitro and invivo at different maturation status. Vaccine lymph node homing was described in the nudemouse model. Besides the chemotactic response, the main components responsible of vaccinemotility and distribution after subcutaneous administration were determined. Finally, the immunostimulatory profile of the vaccine was determined, along with itscapacity to activate antigen-specific T-cell clones at different times after co-culture. Thevaccine-induced response on naïve lymphocytes was also evaluated, regarding cell activation,proliferative response and cytotoxic function against melanoma cells. Altogether, the analysis of variables present during several stages of the DC/Apo-Necvaccine production and administration resulted in a more detailed and improved vaccinedesign. This optimized model has provided strong evidence that suggests it could generate anefficient anti-tumor immune response that should be further evaluated in the clinic.
Fil: Pizzurro, Gabriela Andrea. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.
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