Comparación de métodos de extracción de ADN simples y económicos para el diagnóstico molecular de leptospirosis animal

Autores
Hamer, Micaela; Saraullo, Vanina Rosa; Brihuega, Bibiana Felicitas; Watanabe, Olivia; Martinez, Mara Leila; Grune Loffler, Sylvia
Año de publicación
2019
Idioma
español castellano
Tipo de recurso
artículo
Estado
versión publicada
Descripción
La leptospirosis bovina es una importante enfermedad zoonótica cuyo diagnóstico molecular está ampliamente divulgado. Sin embargo, no existe un método único de extracción de ADN para leptospiras patógenas a partir de muestras clínicas. En este trabajo se utilizó orina bovina contaminada con cultivo de L. interrogans serovar Pomona Pomona para analizar el mejor método comparando: M1.) resina Chelex-100, M2.) papel FTA Whatman y M3.) hervido de la muestra (protocolo casero). De estas tres técnicas, la primera (M1) presentó la mayor sensibilidad al realizar la PCR de diagnóstico, detectándose hasta 2x102 leptospiras/mL. La metodología aquí planteada resultó tener buen rendimiento para la detección de leptospiras en muestras clínicas animales, aunque es necesario su validación con mayor número y diversidad de muestras.
Bovine leptospirosis is an important zoonotic disease whose molecular diagnosis is widely reported. However, there is not a unique method of extraction of DNA for pathogenic leptospires using clinical samples. In this study, bovine urine was contaminated with pure culture of L. interrogans serovar Pomona Pomona in order to compare three of them: M1.) Chelex-100 resin, M2.) FTA Whatman paper and M3.) boiling of the sample (in-house protocol), being the first one the most sensitive when used in diagnostic PCR, detecting up to 2x102 leptospiras/mL. The methodology proposed in this study turned out to have good performance for the detection of leptospires in animal clinical samples, although it should be applied to a greater number of samples and in different stages of the pathology.
Instituto de Patobiología
Fil: Hamer, Micaela. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patobiología. Laboratorio de Leptospirosis; Argentina
Fil: Saraullo, Vanina Rosa. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patobiología. Laboratorio de Leptospirosis; Argentina
Fil: Saraullo, Vanina Rosa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina
Fil: Brihuega, Bibiana Felicitas. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patobiología. Laboratorio de Leptospirosis; Argentina
Fil: Watanabe, Olivia. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patobiología. Laboratorio de Leptospirosis; Argentina
Fil: Martinez, Mara Leila. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patobiología. Laboratorio de Leptospirosis; Argentina
Fil: Grune Loffler, Sylvia. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patobiología. Laboratorio de Leptospirosis; Argentina
Fil: Grune Loffler, Sylvia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina
Fuente
FAVE. Sección Ciencias Veterinarias 18 (2) : 68 -73 (Diciembre 2019)
Materia
Molecular Genetics
Leptospira
DNA Extraction
Diagnosis
Genética Molecular
Extracción de ADN
Diagnóstico
Nivel de accesibilidad
acceso abierto
Condiciones de uso
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/
Repositorio
INTA Digital (INTA)
Institución
Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria
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Bovine leptospirosis is an important zoonotic disease whose molecular diagnosis is widely reported. However, there is not a unique method of extraction of DNA for pathogenic leptospires using clinical samples. In this study, bovine urine was contaminated with pure culture of L. interrogans serovar Pomona Pomona in order to compare three of them: M1.) Chelex-100 resin, M2.) FTA Whatman paper and M3.) boiling of the sample (in-house protocol), being the first one the most sensitive when used in diagnostic PCR, detecting up to 2x102 leptospiras/mL. The methodology proposed in this study turned out to have good performance for the detection of leptospires in animal clinical samples, although it should be applied to a greater number of samples and in different stages of the pathology.
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