Respuesta Inmune en bovinos frente a Mycobacterium paratuberculosis

Autores: Mundo, Silvia Leonor
Año de publicación: 2005
Idioma: español castellano
Tipo de recurso: tesis doctoral
Estado: versión aceptada
Colaborador/a o director/a de tesis: Gentilini, Elida R.
Hajos, Silvia
Gutkind, Gabriel
Fossati, Carlos
Moras, Eduardo
Descripción: Fil: Mundo, Silvia Leonor. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Buenos Aires, Argentina.
La paratuberculosis es una enfermedad infecciosa incurable que afecta al ganado bovino. El agente etiológico es el Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (Map). Los terneros se infectan por vía digestiva, al ingerir leche materna o succionar ubres contaminadas. La sintomatología clínica se observa en bovinos adultos como una enteritis crónica. La enfermedad se caracteriza por diarreas crónicas, mala absorción intestinal, deshidratación, emaciación y muerte. La detección de respuesta inmune humoral es signo de enfermedad progresiva. Se sospecha que el Map podría estar involucrado en la infección humana que se conoce como la Enfermedad de Crohn. Durante el desarrollo de la presente tesis se propusieron los siguientes objetivos: - El desarrollo de un método rápido de detección de Map en leche. - El análisis comparativo de la respuesta inmune humoral en bovinos infectados, vacunados con vacuna de soma total y vacunados con una proteína p34 de membrana específica de Map e inmunodominante para linfocitos B. - La evaluación del efecto de las Inmunoglobulinas específicas para Map y p34 en la ingestión y activación de células macrofágicas de bovino. Se logró desarrollar un método rápido para la detección de leche contaminada con Map utilizando una PCR de IS900, seguida por digestión y metilación que permitió detectar 100 UFC por ml de leche en menos de 2 horas. La respuesta inmune humoral frente a Map en los bovinos infectados o vacunados pudo detectarse con diferentes títulos dependiendo de la forma en que cada grupo tomó contacto con el antígeno (infección o vacunación). Se obtuvo una respuesta típica de inmunización proteica a IgG1, cuando se analizó la respuesta de los vacunados con p34r. En los infectados la respuesta frente a Map no pudo clasificarse como de perfil Th2, ya que se obtuvieron niveles similares de IgG1 e IgG2. La respuesta de isotipo IgG3 fue de bajo nivel y sólo pudo detectarse en bovinos infectados. La evaluación de la funcionalidad de los anticuerpos bovinos en un sistema de infección con Map de macrófagos in vitro permitió determinar que: - La asociación de las micobacterias a los macrófagos bovinos se incrementó al tratar las bacterias con los anticuerpos totales de animales infectados, vacunados con bacteria entera, o con la p34r. La especificidad fue confirmada utilizando los anticuerpos específicos anti Map y p34r. - El tratamiento de Map con el anticuerpo monoclonal específico a p34, incrementó la asociación de Map con los macrófagos, con lo cual se confirmó que los anticuerpos específicos contra la p34 favorecen el ingreso a la célula. - Los anticuerpos de bovinos infectados, incrementaron la activación de NFkB nuclear, mientras que los anticuerpos de bovinos vacunados, no lograron incrementar el nivel basal de activación de las células macrofágicas. - El incremento de NFkB observado solo en los sueros de bovinos infectados, indicaría que existen diferencias funcionales entre los anticuerpos producidos por animales que responden a la infección bacteriana, y aquellos que responden a la bacteria inactivada o a una proteína bacteriana. - No pudo detectase efecto de los anticuerpos bovinos en la producción de óxido nítrico de los macrófagos infectados ni sobre la inducción de la enzima óxido nítrico sintasa. - La activación de los macrófagos bovinos mediada por los complejos inmunes Map-Acs, estaría relacionada a señales asociadas con fosforilación de tirosinas. Los anticuerpos bovinos, actuaron protegiendo a los macrófagos infectados de la apoptosis. Este estudio permite demostrar que para el modelo de infección in vitro de macrófagos bovinos, los anticuerpos favorecieron el ingreso de la bacteria al macrófago, no estimularon los mecanismos bacteriolíticos como el óxido nítrico, e incrementaron la sobrevida de la célula estimulando NFkB e inhibiendo la apoptosis. Los anticuerpos en la infección de Map se han comportado como facilitadores y mantenedores de la infección.
Area Inmunología
Doctora de la Universidad de Buenos Aires
Materia: Paratuberculosis
Mala absorción intestinal
Enfermedad de Crohn
Ternero
Paratuberculosis
Intestinal malabsorption
Crohn's disease
Calf
Respuesta inmune
Bovino
Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis
Enfermedades infecciosas
Diarrea crónica
Deshidratación
Enteritis crónica
Desnutrición
Nivel de accesibilidad: acceso abierto
Condiciones de uso: https://creativecommons.org/licenses/by-ncnd/2.5/ar/
Repositorio
Institución: Universidad de Buenos Aires
OAI Identificador: oai:RDI UBA:avaposgra:HWA_8118

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La detección de respuesta inmune humoral es signo de enfermedad progresiva. Se sospecha que el Map podría estar involucrado en la infección humana que se conoce como la Enfermedad de Crohn. Durante el desarrollo de la presente tesis se propusieron los siguientes objetivos: - El desarrollo de un método rápido de detección de Map en leche. - El análisis comparativo de la respuesta inmune humoral en bovinos infectados, vacunados con vacuna de soma total y vacunados con una proteína p34 de membrana específica de Map e inmunodominante para linfocitos B. - La evaluación del efecto de las Inmunoglobulinas específicas para Map y p34 en la ingestión y activación de células macrofágicas de bovino. Se logró desarrollar un método rápido para la detección de leche contaminada con Map utilizando una PCR de IS900, seguida por digestión y metilación que permitió detectar 100 UFC por ml de leche en menos de 2 horas. La respuesta inmune humoral frente a Map en los bovinos infectados o vacunados pudo detectarse con diferentes títulos dependiendo de la forma en que cada grupo tomó contacto con el antígeno (infección o vacunación). Se obtuvo una respuesta típica de inmunización proteica a IgG1, cuando se analizó la respuesta de los vacunados con p34r. En los infectados la respuesta frente a Map no pudo clasificarse como de perfil Th2, ya que se obtuvieron niveles similares de IgG1 e IgG2. La respuesta de isotipo IgG3 fue de bajo nivel y sólo pudo detectarse en bovinos infectados. La evaluación de la funcionalidad de los anticuerpos bovinos en un sistema de infección con Map de macrófagos in vitro permitió determinar que: - La asociación de las micobacterias a los macrófagos bovinos se incrementó al tratar las bacterias con los anticuerpos totales de animales infectados, vacunados con bacteria entera, o con la p34r. La especificidad fue confirmada utilizando los anticuerpos específicos anti Map y p34r. - El tratamiento de Map con el anticuerpo monoclonal específico a p34, incrementó la asociación de Map con los macrófagos, con lo cual se confirmó que los anticuerpos específicos contra la p34 favorecen el ingreso a la célula. - Los anticuerpos de bovinos infectados, incrementaron la activación de NFkB nuclear, mientras que los anticuerpos de bovinos vacunados, no lograron incrementar el nivel basal de activación de las células macrofágicas. - El incremento de NFkB observado solo en los sueros de bovinos infectados, indicaría que existen diferencias funcionales entre los anticuerpos producidos por animales que responden a la infección bacteriana, y aquellos que responden a la bacteria inactivada o a una proteína bacteriana. - No pudo detectase efecto de los anticuerpos bovinos en la producción de óxido nítrico de los macrófagos infectados ni sobre la inducción de la enzima óxido nítrico sintasa. - La activación de los macrófagos bovinos mediada por los complejos inmunes Map-Acs, estaría relacionada a señales asociadas con fosforilación de tirosinas. 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