Efecto sinérgico de ácidos grasos poliinsaturados (PUFAS) y ácidos nordihidroguaiaretico (NDGA) sobre parámetros metabólicos, inflamatorios y de oxidación celular en el desarrollo...

Autores
Daín, Alejandro
Año de publicación
2016
Idioma
español castellano
Tipo de recurso
tesis doctoral
Estado
versión publicada
Colaborador/a o director/a de tesis
Eynard, Aldo Renato
Descripción
107 p.
Tesis - Doctor en Medicina y Cirugía - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Médicas, 2016
Fil: Daín, Alejandro. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Médicas; Argentina.
MARCO TEÓRICO: La Diabetes Mellitus (DM) es una enfermedad compleja con progresivas alteraciones en los parámetros metabólicos incluyendo también un estado de inflamación crónica sistémica de bajo grado, entre otros. La actividad física y la planificación nutricional son herramientas efectivas para prevenir y tratar la enfermedad y disminuir otros factores de riesgo relacionados, como el sobrepeso y obesidad. El modelo animal de ratas Stillman Salgado (ratas eSS) se basa en el empleo experimental de una variedad de ratas Wistar las cuales desarrollan espontánea y progresivamente una forma de DM, habitualmente con repercusiones clínicas y de laboratorio de leves a moderadas. Con la evolución de la DM, los animales muestran progresiva intolerancia a la glucosa, con aumento de los niveles plasmáticos de insulina, triglicéridos y glucosa, entre otros parámetros alterados. Es ampliamente conocido que los perfiles lipídicos influyen y son influidos por diversas patologías, como por ejemplo enfermedad Cardiovascular, DM, obesidad, entre otras. La relación entre la ingesta de ácidos grasos poli insaturados (PUFAs) de la serie omega 6/omega 3 (ω-6/ ω-3) menor a 4:1 se relaciona con bajos índices inflamatorios y de oxidación celular, hallándose en la dieta denominada “occidental” un desbalanceado consumo de carnes rojas, un disbalance en la alimentación respecto a estos PUFAs, con porcentajes aún mayores a 10:1, inclusive llegando a 40:1. Ello colabora para que se produzca un aumento progresivo de moléculas inflamatorias (eicosanoides en general) a partir de ácido araquidónico (AA), PUFAs ω-6, constituyendo la denominación común en estas entidades el establecimiento de inflamación crónica sostenida de bajo grado (CLGI). El objetivo de esta investigación es analizar comparativamente los efectos de la suplementación con PUFAs ω-3 y ω-6, con o sin el agregado de ácido nordihidroguaiarético (NDGA), una molécula antiinflamatoria, presente en plantas de la flora nativa, sobre ciertos parámetros metabólicos e inflamatorios, con el propósito de determinar cuál es la combinación más adecuada para prevenir, demorar o atenuar el curso preclínico y clínico de DM en nuestro modelo experimental y así sugerir posibilidades que fuesen extrapolables en la alimentación de los seres humanos. MATERIALES, MÉTODOS Y DISEÑO EXPERIMENTAL: A partir del 10mo día post-destete (destete tardío) los animales fueron tratados una vez al mes, durante el transcurso de 12 meses con la administración intraperitoneal (IP)(1) de 0,4ml de solución salina isotónica (0,45%) + PUFAs ω-3, ácido eicosapentaenoico (EPA 35%) y ácido docosahexaenoico (DHA 40%) a razón de 6,25mg/Kg en la formulación de aceite de pescado comercial, o de PUFAs ω-6 (AA 90% a razón de 6,25mg/Kg), diluido en 0,5% de etanol. Dos grupos tratados con ω- 3 y ω-6 fueron adicionalmente suplementados con 1.9mg/Kg de NDGA. Se obtuvieron muestras plasmáticas para evaluar: glucemia en ayunas y prueba de sobrecarga oral de glucosa (PTOG 1,75mg/kg de solución glucosada tras 8 hs de ayuno de sólidos), triglicéridos, colesterol total, hemoglobina glicosilada A1c (Hb A1c) y marcadores de inflamación: proteína C reactiva (CRP), gamma glutamyl transpeptidasa (GGTP), hidro y lipo peróxidos, nitritos e interleucina 6 (IL-6), esta última en plasma y órganos (hígado, riñón y páncreas). Las muestras fueron obtenidas al destete, a los 6 y 12 meses de vida de los animales. Se incluyeron dos grupos control, ratas Wistar (control sin diabetes) y ratas eSS (ratas con diabetes, no tratadas). Los controles recibieron el mismo volumen de solución salina isotónica (SAL) +0,5% de etanol y con la misma frecuencia que los animales tratados. El perfil de ácidos grasos plasmáticos totales fue determinado por medio de cromatografía gaseosa a los 12 meses de edad. Los marcadores de CLGI (IL-6, PCR, Nitritos, y Peróxidos) se midieron por medio de métodos ELISA y fotocolorimétricos. RESULTADOS Y DISCUSIÓN: Al año de vida, el perfil de lípidos plasmáticos y tisulares totales evidenciaron modificaciones cuantitativas y cualitativas en los animales diabéticos sin tratar, así como también, en relación al tratamiento recibido. Las modificaciones favorables que mostraremos a continuación en los perfiles de PUFAs ω-3 y ω-6, con o sin el agregado de NDGA, podrían reestablecer el disbalance que se encuentra en las ratas con diabetes al menos en este modelo, disminuir progresivamente la CLGI y sus expresiones metabólicas deletéreas. En conjunto, los valores de las glucemias en ayunas y PostPTOG, así como también los de la A1c mostraron una disminución significativa en los animales tratados con PUFAs ω-3, siendo aún más marcada esta disminución cuando los animales recibieron conjuntamente NDGA, en comparación con los grupos eSS control y los tratados con ω-6. El lote de ratas eSS mostró el mayor incremento de triglicéridos plasmáticos, hecho que también fue observado en el grupo de ratas ω-6 (con y sin agregado de NDGA), aunque los valores fueron morigerados respecto al grupo control eSS. En relación a GGTP, los valores más bajos fueron registrados en el grupo de ratas control Wistar sanas y en las tratadas con ω-3, suplementadas con el antiinflamatorio NDGA. Por otra parte, las determinaciones de los marcadores inflamatorios, así como los de oxidación tisular fueron significativamente menores en las ratas eSS que recibieron el tratamiento con ω-3, acercándose casi a los valores observados en el grupo Wistar, efecto más marcado aun cuando recibieron suplementación con NDGA. En el lote de ratas tratadas con PUFAs ω-3 (con y sin el agregado de NDGA) se registró una correlación inversa entre glucemias (en ayuna y post POTG) y los valores plasmáticos de TGs, CRP, GGTP, IL-6 y peróxidos, respectivamente, probablemente debido a la menor reacción de oxidación observada en este grupo, con modificación de la vía metabólica a favor de PUFAs ω-3 y sus moléculas derivadas. Respecto, a los parámetros inflamatorios, en general se registraron, los menores valores en los animales tratados con ω-3 respecto tanto de los que recibieron ω-6 como en las ratas eSS control, en forma estadísticamente significativas. En el lote ω- 3 estos parámetros se parecieron a los registrados en los de animales Wistar sanos. CONCLUSIONES: Confirmamos así que el modelo animal de ratas eSS es una buena herramienta para el estudio de la historia natural de la DM y aportamos evidencias nuevas sobre marcadores de inflamación crónica relacionados. La administración de ω-3 suplementado con NDGA en las dosis utilizadas, disminuye los parámetros inflamatorios, metabólicos y de estrés oxidativo, pudiendo ser su combinación una alternativa promisoria en la prevención y tratamiento de la DM humana, sirviendo este estudio para motivarnos en ampliar nuestros resultados, investigando el efecto de ω-3 PUFA con y sin NDGA, a través la alimentación con dietas experimentales.
INTRODUCTION: Diabetes Mellitus (DM) is a complex disease with alterations in metabolic and inflammatory indices. Stillman Salgado rats (eSS rats) spontaneously develop DM once reached middle age showing progressive impairment of glucose tolerance along with hypertriglyceridemia, hyperglycemia, and hyperinsulinemia. In the present study, we analyzed the effects of ω-3 and ω-6 polyunsaturated fatty acids (PUFAs) supplementation with or without nordihydroguaiaretic acid (NDGA), a strong, natural antioxidant and Lipooxygenase inhibitor molecule, isolated from native flora plants, on metabolic and inflammatory parameters in eSS rats to search whether which combination may delay the development of DM and/or prevent its progression. MATERIALS AND METHODS: eSS rats after 10th days stopping breastfeed were monthly administered intraperitoneal (IP) with ω-3 commercial fish oil (EPA 35% and DHA 40% 6,25mg/Kg) and purchased ω-6 (90% arachidonic acid 6,25mg/Kg) throughout twelve months. Two additional groups of rats received IP 1.9mg/Kg NDGA along with w-3 and w-6 fatty acids. Blood and tissue samples were collected to determine plasma TGs (TG), total plasma fatty acids (FA), A1C hemoglobin, C- reactive protein (CRP), Gamma glutamyl transpeptidase (GGTP), lipo and hydro peroxides, nitrites and IL-6 (in plasma and in different organs as liver, kidney and pancreas) and then underwent oral glucose tolerance test (OGTT) as well. Wistar and eSS rats without any treatment were used as healthy and diseased controls, respectively. RESULTS AND DISCUSION: Plasma lipids profile showed qualitative and quantitative modifications in ω-3 PUFAs animals treated groups, and desirable’s changes could restore the natural balance ω-6/ω-3. Other metabolic and inflammation test, like as: fasting and post-prandial blood glucose levels, and glycosylated Hb (HbA1C) showed significant improvements in ω-3 PUFA treated animals that were further improved by simultaneous treatment with NDGA (ω-3 + NDGA) in comparison with eSS control group. Serum triglyceride (TG) levels also showed improvement in ω-3 group (with and without NDGA) compared with ω-6 group and eSS control groups. As expected, the lowest values of GGTP were found in Wistar rats compared to ω-3 eSS rats plus NDGA supplementation. ω-3 group (with or without NDGA) showed an inverse correlation between fasting and postprandial blood glucose, and showed lower plasma levels of GGTP, TG and CRP in comparison to ω-6 and non-treated eSS control groups, possibly originated in ω-3 PUFA anti-oxidative molecules when this metabolic and anti-oxidative pathway was enhanced. Inflammatory and oxidative markers showed lower levels in plasma and organs in ω-3 group when compared to ω-6. CONCLUSIONS: we confirm that eSS rats are a useful model to study clinical course of DM pathophysiology and some new data about related inflammatory parameters are given. ω-3 PUFAs supplementation plus NDGA at the doses tested improved inflammatory, metabolic and oxidative stress indices. Hence, a combination of ω-3 PUFA plus anti-inflammatory agents may be useful to prevent and treatment of DM. our results will motivate us for further researches using semisynthetic diets added with ω-3 PUFA and NDGA in long standing studies.
Fil: Daín, Alejandro. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Médicas; Argentina.
Materia
Ácidos grasos
Diabetes mellitus
Metabolismo
Nivel de accesibilidad
acceso abierto
Condiciones de uso
Repositorio
Repositorio Digital Universitario (UNC)
Institución
Universidad Nacional de Córdoba
OAI Identificador
oai:rdu.unc.edu.ar:11086/563249
Acceder
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El modelo animal de ratas Stillman Salgado (ratas eSS) se basa en el empleo experimental de una variedad de ratas Wistar las cuales desarrollan espontánea y progresivamente una forma de DM, habitualmente con repercusiones clínicas y de laboratorio de leves a moderadas. Con la evolución de la DM, los animales muestran progresiva intolerancia a la glucosa, con aumento de los niveles plasmáticos de insulina, triglicéridos y glucosa, entre otros parámetros alterados. Es ampliamente conocido que los perfiles lipídicos influyen y son influidos por diversas patologías, como por ejemplo enfermedad Cardiovascular, DM, obesidad, entre otras. La relación entre la ingesta de ácidos grasos poli insaturados (PUFAs) de la serie omega 6/omega 3 (ω-6/ ω-3) menor a 4:1 se relaciona con bajos índices inflamatorios y de oxidación celular, hallándose en la dieta denominada “occidental” un desbalanceado consumo de carnes rojas, un disbalance en la alimentación respecto a estos PUFAs, con porcentajes aún mayores a 10:1, inclusive llegando a 40:1. Ello colabora para que se produzca un aumento progresivo de moléculas inflamatorias (eicosanoides en general) a partir de ácido araquidónico (AA), PUFAs ω-6, constituyendo la denominación común en estas entidades el establecimiento de inflamación crónica sostenida de bajo grado (CLGI). El objetivo de esta investigación es analizar comparativamente los efectos de la suplementación con PUFAs ω-3 y ω-6, con o sin el agregado de ácido nordihidroguaiarético (NDGA), una molécula antiinflamatoria, presente en plantas de la flora nativa, sobre ciertos parámetros metabólicos e inflamatorios, con el propósito de determinar cuál es la combinación más adecuada para prevenir, demorar o atenuar el curso preclínico y clínico de DM en nuestro modelo experimental y así sugerir posibilidades que fuesen extrapolables en la alimentación de los seres humanos. MATERIALES, MÉTODOS Y DISEÑO EXPERIMENTAL: A partir del 10mo día post-destete (destete tardío) los animales fueron tratados una vez al mes, durante el transcurso de 12 meses con la administración intraperitoneal (IP)(1) de 0,4ml de solución salina isotónica (0,45%) + PUFAs ω-3, ácido eicosapentaenoico (EPA 35%) y ácido docosahexaenoico (DHA 40%) a razón de 6,25mg/Kg en la formulación de aceite de pescado comercial, o de PUFAs ω-6 (AA 90% a razón de 6,25mg/Kg), diluido en 0,5% de etanol. Dos grupos tratados con ω- 3 y ω-6 fueron adicionalmente suplementados con 1.9mg/Kg de NDGA. Se obtuvieron muestras plasmáticas para evaluar: glucemia en ayunas y prueba de sobrecarga oral de glucosa (PTOG 1,75mg/kg de solución glucosada tras 8 hs de ayuno de sólidos), triglicéridos, colesterol total, hemoglobina glicosilada A1c (Hb A1c) y marcadores de inflamación: proteína C reactiva (CRP), gamma glutamyl transpeptidasa (GGTP), hidro y lipo peróxidos, nitritos e interleucina 6 (IL-6), esta última en plasma y órganos (hígado, riñón y páncreas). Las muestras fueron obtenidas al destete, a los 6 y 12 meses de vida de los animales. Se incluyeron dos grupos control, ratas Wistar (control sin diabetes) y ratas eSS (ratas con diabetes, no tratadas). Los controles recibieron el mismo volumen de solución salina isotónica (SAL) +0,5% de etanol y con la misma frecuencia que los animales tratados. El perfil de ácidos grasos plasmáticos totales fue determinado por medio de cromatografía gaseosa a los 12 meses de edad. Los marcadores de CLGI (IL-6, PCR, Nitritos, y Peróxidos) se midieron por medio de métodos ELISA y fotocolorimétricos. RESULTADOS Y DISCUSIÓN: Al año de vida, el perfil de lípidos plasmáticos y tisulares totales evidenciaron modificaciones cuantitativas y cualitativas en los animales diabéticos sin tratar, así como también, en relación al tratamiento recibido. Las modificaciones favorables que mostraremos a continuación en los perfiles de PUFAs ω-3 y ω-6, con o sin el agregado de NDGA, podrían reestablecer el disbalance que se encuentra en las ratas con diabetes al menos en este modelo, disminuir progresivamente la CLGI y sus expresiones metabólicas deletéreas. En conjunto, los valores de las glucemias en ayunas y PostPTOG, así como también los de la A1c mostraron una disminución significativa en los animales tratados con PUFAs ω-3, siendo aún más marcada esta disminución cuando los animales recibieron conjuntamente NDGA, en comparación con los grupos eSS control y los tratados con ω-6. El lote de ratas eSS mostró el mayor incremento de triglicéridos plasmáticos, hecho que también fue observado en el grupo de ratas ω-6 (con y sin agregado de NDGA), aunque los valores fueron morigerados respecto al grupo control eSS. En relación a GGTP, los valores más bajos fueron registrados en el grupo de ratas control Wistar sanas y en las tratadas con ω-3, suplementadas con el antiinflamatorio NDGA. Por otra parte, las determinaciones de los marcadores inflamatorios, así como los de oxidación tisular fueron significativamente menores en las ratas eSS que recibieron el tratamiento con ω-3, acercándose casi a los valores observados en el grupo Wistar, efecto más marcado aun cuando recibieron suplementación con NDGA. En el lote de ratas tratadas con PUFAs ω-3 (con y sin el agregado de NDGA) se registró una correlación inversa entre glucemias (en ayuna y post POTG) y los valores plasmáticos de TGs, CRP, GGTP, IL-6 y peróxidos, respectivamente, probablemente debido a la menor reacción de oxidación observada en este grupo, con modificación de la vía metabólica a favor de PUFAs ω-3 y sus moléculas derivadas. Respecto, a los parámetros inflamatorios, en general se registraron, los menores valores en los animales tratados con ω-3 respecto tanto de los que recibieron ω-6 como en las ratas eSS control, en forma estadísticamente significativas. En el lote ω- 3 estos parámetros se parecieron a los registrados en los de animales Wistar sanos. CONCLUSIONES: Confirmamos así que el modelo animal de ratas eSS es una buena herramienta para el estudio de la historia natural de la DM y aportamos evidencias nuevas sobre marcadores de inflamación crónica relacionados. La administración de ω-3 suplementado con NDGA en las dosis utilizadas, disminuye los parámetros inflamatorios, metabólicos y de estrés oxidativo, pudiendo ser su combinación una alternativa promisoria en la prevención y tratamiento de la DM humana, sirviendo este estudio para motivarnos en ampliar nuestros resultados, investigando el efecto de ω-3 PUFA con y sin NDGA, a través la alimentación con dietas experimentales.INTRODUCTION: Diabetes Mellitus (DM) is a complex disease with alterations in metabolic and inflammatory indices. Stillman Salgado rats (eSS rats) spontaneously develop DM once reached middle age showing progressive impairment of glucose tolerance along with hypertriglyceridemia, hyperglycemia, and hyperinsulinemia. In the present study, we analyzed the effects of ω-3 and ω-6 polyunsaturated fatty acids (PUFAs) supplementation with or without nordihydroguaiaretic acid (NDGA), a strong, natural antioxidant and Lipooxygenase inhibitor molecule, isolated from native flora plants, on metabolic and inflammatory parameters in eSS rats to search whether which combination may delay the development of DM and/or prevent its progression. MATERIALS AND METHODS: eSS rats after 10th days stopping breastfeed were monthly administered intraperitoneal (IP) with ω-3 commercial fish oil (EPA 35% and DHA 40% 6,25mg/Kg) and purchased ω-6 (90% arachidonic acid 6,25mg/Kg) throughout twelve months. Two additional groups of rats received IP 1.9mg/Kg NDGA along with w-3 and w-6 fatty acids. Blood and tissue samples were collected to determine plasma TGs (TG), total plasma fatty acids (FA), A1C hemoglobin, C- reactive protein (CRP), Gamma glutamyl transpeptidase (GGTP), lipo and hydro peroxides, nitrites and IL-6 (in plasma and in different organs as liver, kidney and pancreas) and then underwent oral glucose tolerance test (OGTT) as well. Wistar and eSS rats without any treatment were used as healthy and diseased controls, respectively. RESULTS AND DISCUSION: Plasma lipids profile showed qualitative and quantitative modifications in ω-3 PUFAs animals treated groups, and desirable’s changes could restore the natural balance ω-6/ω-3. Other metabolic and inflammation test, like as: fasting and post-prandial blood glucose levels, and glycosylated Hb (HbA1C) showed significant improvements in ω-3 PUFA treated animals that were further improved by simultaneous treatment with NDGA (ω-3 + NDGA) in comparison with eSS control group. Serum triglyceride (TG) levels also showed improvement in ω-3 group (with and without NDGA) compared with ω-6 group and eSS control groups. As expected, the lowest values of GGTP were found in Wistar rats compared to ω-3 eSS rats plus NDGA supplementation. ω-3 group (with or without NDGA) showed an inverse correlation between fasting and postprandial blood glucose, and showed lower plasma levels of GGTP, TG and CRP in comparison to ω-6 and non-treated eSS control groups, possibly originated in ω-3 PUFA anti-oxidative molecules when this metabolic and anti-oxidative pathway was enhanced. Inflammatory and oxidative markers showed lower levels in plasma and organs in ω-3 group when compared to ω-6. CONCLUSIONS: we confirm that eSS rats are a useful model to study clinical course of DM pathophysiology and some new data about related inflammatory parameters are given. ω-3 PUFAs supplementation plus NDGA at the doses tested improved inflammatory, metabolic and oxidative stress indices. Hence, a combination of ω-3 PUFA plus anti-inflammatory agents may be useful to prevent and treatment of DM. our results will motivate us for further researches using semisynthetic diets added with ω-3 PUFA and NDGA in long standing studies.Fil: Daín, Alejandro. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Médicas; Argentina.Eynard, Aldo Renato2016info:eu-repo/semantics/doctoralThesisinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionhttp://purl.org/coar/resource_type/c_db06info:ar-repo/semantics/tesisDoctoralapplication/pdfDaín, A. (2016). Efecto sinérgico de ácidos grasos poliinsaturados (PUFAS) y ácidos nordihidroguaiaretico (NDGA) sobre parámetros metabólicos, inflamatorios y de oxidación celular en el desarrollo de diabetes espontánea de un modelo experimental [Tesis de doctorado, Universidad Nacional de Córdoba]. 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Es ampliamente conocido que los perfiles lipídicos influyen y son influidos por diversas patologías, como por ejemplo enfermedad Cardiovascular, DM, obesidad, entre otras. La relación entre la ingesta de ácidos grasos poli insaturados (PUFAs) de la serie omega 6/omega 3 (ω-6/ ω-3) menor a 4:1 se relaciona con bajos índices inflamatorios y de oxidación celular, hallándose en la dieta denominada “occidental” un desbalanceado consumo de carnes rojas, un disbalance en la alimentación respecto a estos PUFAs, con porcentajes aún mayores a 10:1, inclusive llegando a 40:1. Ello colabora para que se produzca un aumento progresivo de moléculas inflamatorias (eicosanoides en general) a partir de ácido araquidónico (AA), PUFAs ω-6, constituyendo la denominación común en estas entidades el establecimiento de inflamación crónica sostenida de bajo grado (CLGI). El objetivo de esta investigación es analizar comparativamente los efectos de la suplementación con PUFAs ω-3 y ω-6, con o sin el agregado de ácido nordihidroguaiarético (NDGA), una molécula antiinflamatoria, presente en plantas de la flora nativa, sobre ciertos parámetros metabólicos e inflamatorios, con el propósito de determinar cuál es la combinación más adecuada para prevenir, demorar o atenuar el curso preclínico y clínico de DM en nuestro modelo experimental y así sugerir posibilidades que fuesen extrapolables en la alimentación de los seres humanos. MATERIALES, MÉTODOS Y DISEÑO EXPERIMENTAL: A partir del 10mo día post-destete (destete tardío) los animales fueron tratados una vez al mes, durante el transcurso de 12 meses con la administración intraperitoneal (IP)(1) de 0,4ml de solución salina isotónica (0,45%) + PUFAs ω-3, ácido eicosapentaenoico (EPA 35%) y ácido docosahexaenoico (DHA 40%) a razón de 6,25mg/Kg en la formulación de aceite de pescado comercial, o de PUFAs ω-6 (AA 90% a razón de 6,25mg/Kg), diluido en 0,5% de etanol. Dos grupos tratados con ω- 3 y ω-6 fueron adicionalmente suplementados con 1.9mg/Kg de NDGA. Se obtuvieron muestras plasmáticas para evaluar: glucemia en ayunas y prueba de sobrecarga oral de glucosa (PTOG 1,75mg/kg de solución glucosada tras 8 hs de ayuno de sólidos), triglicéridos, colesterol total, hemoglobina glicosilada A1c (Hb A1c) y marcadores de inflamación: proteína C reactiva (CRP), gamma glutamyl transpeptidasa (GGTP), hidro y lipo peróxidos, nitritos e interleucina 6 (IL-6), esta última en plasma y órganos (hígado, riñón y páncreas). Las muestras fueron obtenidas al destete, a los 6 y 12 meses de vida de los animales. Se incluyeron dos grupos control, ratas Wistar (control sin diabetes) y ratas eSS (ratas con diabetes, no tratadas). Los controles recibieron el mismo volumen de solución salina isotónica (SAL) +0,5% de etanol y con la misma frecuencia que los animales tratados. El perfil de ácidos grasos plasmáticos totales fue determinado por medio de cromatografía gaseosa a los 12 meses de edad. Los marcadores de CLGI (IL-6, PCR, Nitritos, y Peróxidos) se midieron por medio de métodos ELISA y fotocolorimétricos. RESULTADOS Y DISCUSIÓN: Al año de vida, el perfil de lípidos plasmáticos y tisulares totales evidenciaron modificaciones cuantitativas y cualitativas en los animales diabéticos sin tratar, así como también, en relación al tratamiento recibido. Las modificaciones favorables que mostraremos a continuación en los perfiles de PUFAs ω-3 y ω-6, con o sin el agregado de NDGA, podrían reestablecer el disbalance que se encuentra en las ratas con diabetes al menos en este modelo, disminuir progresivamente la CLGI y sus expresiones metabólicas deletéreas. 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Por otra parte, las determinaciones de los marcadores inflamatorios, así como los de oxidación tisular fueron significativamente menores en las ratas eSS que recibieron el tratamiento con ω-3, acercándose casi a los valores observados en el grupo Wistar, efecto más marcado aun cuando recibieron suplementación con NDGA. En el lote de ratas tratadas con PUFAs ω-3 (con y sin el agregado de NDGA) se registró una correlación inversa entre glucemias (en ayuna y post POTG) y los valores plasmáticos de TGs, CRP, GGTP, IL-6 y peróxidos, respectivamente, probablemente debido a la menor reacción de oxidación observada en este grupo, con modificación de la vía metabólica a favor de PUFAs ω-3 y sus moléculas derivadas. Respecto, a los parámetros inflamatorios, en general se registraron, los menores valores en los animales tratados con ω-3 respecto tanto de los que recibieron ω-6 como en las ratas eSS control, en forma estadísticamente significativas. En el lote ω- 3 estos parámetros se parecieron a los registrados en los de animales Wistar sanos. CONCLUSIONES: Confirmamos así que el modelo animal de ratas eSS es una buena herramienta para el estudio de la historia natural de la DM y aportamos evidencias nuevas sobre marcadores de inflamación crónica relacionados. La administración de ω-3 suplementado con NDGA en las dosis utilizadas, disminuye los parámetros inflamatorios, metabólicos y de estrés oxidativo, pudiendo ser su combinación una alternativa promisoria en la prevención y tratamiento de la DM humana, sirviendo este estudio para motivarnos en ampliar nuestros resultados, investigando el efecto de ω-3 PUFA con y sin NDGA, a través la alimentación con dietas experimentales.
INTRODUCTION: Diabetes Mellitus (DM) is a complex disease with alterations in metabolic and inflammatory indices. Stillman Salgado rats (eSS rats) spontaneously develop DM once reached middle age showing progressive impairment of glucose tolerance along with hypertriglyceridemia, hyperglycemia, and hyperinsulinemia. In the present study, we analyzed the effects of ω-3 and ω-6 polyunsaturated fatty acids (PUFAs) supplementation with or without nordihydroguaiaretic acid (NDGA), a strong, natural antioxidant and Lipooxygenase inhibitor molecule, isolated from native flora plants, on metabolic and inflammatory parameters in eSS rats to search whether which combination may delay the development of DM and/or prevent its progression. MATERIALS AND METHODS: eSS rats after 10th days stopping breastfeed were monthly administered intraperitoneal (IP) with ω-3 commercial fish oil (EPA 35% and DHA 40% 6,25mg/Kg) and purchased ω-6 (90% arachidonic acid 6,25mg/Kg) throughout twelve months. Two additional groups of rats received IP 1.9mg/Kg NDGA along with w-3 and w-6 fatty acids. Blood and tissue samples were collected to determine plasma TGs (TG), total plasma fatty acids (FA), A1C hemoglobin, C- reactive protein (CRP), Gamma glutamyl transpeptidase (GGTP), lipo and hydro peroxides, nitrites and IL-6 (in plasma and in different organs as liver, kidney and pancreas) and then underwent oral glucose tolerance test (OGTT) as well. Wistar and eSS rats without any treatment were used as healthy and diseased controls, respectively. RESULTS AND DISCUSION: Plasma lipids profile showed qualitative and quantitative modifications in ω-3 PUFAs animals treated groups, and desirable’s changes could restore the natural balance ω-6/ω-3. Other metabolic and inflammation test, like as: fasting and post-prandial blood glucose levels, and glycosylated Hb (HbA1C) showed significant improvements in ω-3 PUFA treated animals that were further improved by simultaneous treatment with NDGA (ω-3 + NDGA) in comparison with eSS control group. Serum triglyceride (TG) levels also showed improvement in ω-3 group (with and without NDGA) compared with ω-6 group and eSS control groups. As expected, the lowest values of GGTP were found in Wistar rats compared to ω-3 eSS rats plus NDGA supplementation. ω-3 group (with or without NDGA) showed an inverse correlation between fasting and postprandial blood glucose, and showed lower plasma levels of GGTP, TG and CRP in comparison to ω-6 and non-treated eSS control groups, possibly originated in ω-3 PUFA anti-oxidative molecules when this metabolic and anti-oxidative pathway was enhanced. Inflammatory and oxidative markers showed lower levels in plasma and organs in ω-3 group when compared to ω-6. CONCLUSIONS: we confirm that eSS rats are a useful model to study clinical course of DM pathophysiology and some new data about related inflammatory parameters are given. ω-3 PUFAs supplementation plus NDGA at the doses tested improved inflammatory, metabolic and oxidative stress indices. Hence, a combination of ω-3 PUFA plus anti-inflammatory agents may be useful to prevent and treatment of DM. our results will motivate us for further researches using semisynthetic diets added with ω-3 PUFA and NDGA in long standing studies.
Fil: Daín, Alejandro. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Médicas; Argentina.
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