Optimización de técnicas de PCR para la detección de los microsporidios Encephalitozoon hellem, E. intestinalis y E. cuniculi en muestras de materia fecal

Autores
Mena, Cristian Javier; Silva de Araújo, Ronalda; Burstein, Verónica Liliana; Guasconi, Lorena; Beccacece, Ignacio; Almeida, Mariel; Bossio, Sabrina Noemi; Barnes, Andres; Cervi, Laura Alejandra; Lallo, Maria Anete; Chiapello, Laura Silvina
Año de publicación
2022
Idioma
español castellano
Tipo de recurso
documento de conferencia
Estado
versión publicada
Descripción
Fil: Mena, Cristian Javier. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina.
Fil: Mena, Cristian Javier. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigación en Bioquímica Clínica e Inmunología (CIBICI); Argentina.
Fil: Silva de Araújo, Ronalda. Universidade Bandeirante de São Paulo. Companhia Ambiental do Estado de São Paulo (CETESB); Brasil.
Fil: Burstein, Verónica Liliana. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquimica Clinica; Argentina.
Fil: Burstein, Verónica Liliana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigación en Bioquímica Clínica e Inmunología (CIBICI); Argentina.
Fil: Guasconi, Lorena. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina.
Fil: Guasconi, Lorena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigación en Bioquímica Clínica e Inmunología (CIBICI); Argentina.
Fil: Beccacece, Ignacio. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina.
Fil: Beccacece, Ignacio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigación en Bioquímica Clínica e Inmunología (CIBICI); Argentina.
Fil: Almeida, Mariel. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina.
Fil: Almeida, Mariel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigación en Bioquímica Clínica e Inmunología (CIBICI); Argentina.
Fil: Bossio, Sabrina Noemi. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas.
Fil: Bossio, Sabrina Noemi. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigación en Bioquímica Clínica e Inmunología (CIBICI); Argentina.
Fil: Barnes, Andres. Universidad Nacional de Córdoba.Facultad de Ciencias Médicas; Argentina.
Fil: Barnes, Andres. Córdoba. Gobierno de la Provincia de Córdoba. Ministerio de Salud de la Provincia de Córdoba. Unidad Microbiología del Laboratorio de Diagnóstico del Hospital Rawson; Argentina.
Fil: Cervi, Laura Alejandra. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica; Argentina.
Fil: Cervi, Laura Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigación en Bioquímica Clínica e Inmunología (CIBICI); Argentina.
Fil: Lallo, Maria Anete. Universidade Paulista. Instituto de Ciências da Saúde (ICS); Brasil.
Fil: Chiapello, Laura Silvina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina.
Fil: Chiapello, Laura Silvina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología (CIBICI); Argentina.
Los microsporidios son patógenos oportunistas en individuos inmunocomprometidos, causando diarrea crónica e infecciones diseminadas. Previamente, hemos estandarizado una Nested PCR para la detección de Enterocytozoon bieneusi en heces, la especie más frecuentemente aislada. Sin embargo, especies de Enterocytozoon también pueden causar síndrome debilitante.El objetivo de este trabajo fue evaluar diferentes técnicas de PCR para la detección de Encephalitozoon intestinalis, E. hellem y E. cuniculi en cultivos celulares infectados con esporas y en muestras de materia fecal (MF).Se realizaron infecciones de la línea celular RK13 con esporas de E.intestinalis, E. hellem o E. cuniculi. Las células infectadas fueron lisadas y las esporas se detectaron por coloración Tricrómica de Weber. La extracción de ADN se realizó de esporas provenientes de cultivo y de MF de individuos sanos previamente inoculadas con esporas. Se evaluó el rendimiento y calidad de ADN (NanoDrop?, Themofisher) de diferentes técnicas de extracción utilizando dos kits comerciales (Qiagen®/Productos Biológicos®), siguiendo los protocolos de los fabricantes o realizando modificaciones. Se evaluó una PCR dirigida contra el ADN ribosomal de varios géneros de microsporidios (PCR panmicrosporidia) y una PCR con primers específicos para E. intestinalis.El mejor rendimiento y calidad de ADN se obtuvo con el kit Qiagen, con modificaciones en incubación a 65°C previo a la lisis y ruptura mecánica con perlas de vidrio. La PCR panmicrosporidia fue eficiente en amplificar una banda de 1200-1300pb (específica de microsporidios) a partir de ADN de los cultivosinfectados y de las heces inoculadas con E. hellem y E. cuniculi. Se obtuvo amplificación de un producto de 930pb específico de E. intestinalis utilizando una PCR especifica a partir de cultivos celulares. Estos resultados demuestran que ambas PCR son buenas candidatas para continuar en su optimización para aplicación en el diagnóstico de microsporidiosis.
https://protozoologia.org.ar/congresos-y-reuniones-sap/xxxiii-reunion-anual-sap-2022/
Fil: Mena, Cristian Javier. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina.
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Fil: Bossio, Sabrina Noemi. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas.
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Fil: Barnes, Andres. Universidad Nacional de Córdoba.Facultad de Ciencias Médicas; Argentina.
Fil: Barnes, Andres. Córdoba. Gobierno de la Provincia de Córdoba. Ministerio de Salud de la Provincia de Córdoba. Unidad Microbiología del Laboratorio de Diagnóstico del Hospital Rawson; Argentina.
Fil: Cervi, Laura Alejandra. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica; Argentina.
Fil: Cervi, Laura Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigación en Bioquímica Clínica e Inmunología (CIBICI); Argentina.
Fil: Lallo, Maria Anete. Universidade Paulista. Instituto de Ciências da Saúde (ICS); Brasil.
Fil: Chiapello, Laura Silvina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina.
Fil: Chiapello, Laura Silvina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología (CIBICI); Argentina.
Enfermedades Infecciosas
Materia
Microsporidios
Enterocytozoon
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Nivel de accesibilidad
acceso abierto
Condiciones de uso
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Repositorio Digital Universitario (UNC)
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Departamento de Bioquimica Clinica; Argentina.Fil: Burstein, Verónica Liliana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigación en Bioquímica Clínica e Inmunología (CIBICI); Argentina.Fil: Guasconi, Lorena. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina.Fil: Guasconi, Lorena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigación en Bioquímica Clínica e Inmunología (CIBICI); Argentina.Fil: Beccacece, Ignacio. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina.Fil: Beccacece, Ignacio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigación en Bioquímica Clínica e Inmunología (CIBICI); Argentina.Fil: Almeida, Mariel. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina.Fil: Almeida, Mariel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigación en Bioquímica Clínica e Inmunología (CIBICI); Argentina.Fil: Bossio, Sabrina Noemi. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas.Fil: Bossio, Sabrina Noemi. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigación en Bioquímica Clínica e Inmunología (CIBICI); Argentina.Fil: Barnes, Andres. Universidad Nacional de Córdoba.Facultad de Ciencias Médicas; Argentina.Fil: Barnes, Andres. Córdoba. Gobierno de la Provincia de Córdoba. Ministerio de Salud de la Provincia de Córdoba. Unidad Microbiología del Laboratorio de Diagnóstico del Hospital Rawson; Argentina.Fil: Cervi, Laura Alejandra. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica; Argentina.Fil: Cervi, Laura Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigación en Bioquímica Clínica e Inmunología (CIBICI); Argentina.Fil: Lallo, Maria Anete. Universidade Paulista. Instituto de Ciências da Saúde (ICS); Brasil.Fil: Chiapello, Laura Silvina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina.Fil: Chiapello, Laura Silvina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología (CIBICI); Argentina.Los microsporidios son patógenos oportunistas en individuos inmunocomprometidos, causando diarrea crónica e infecciones diseminadas. Previamente, hemos estandarizado una Nested PCR para la detección de Enterocytozoon bieneusi en heces, la especie más frecuentemente aislada. Sin embargo, especies de Enterocytozoon también pueden causar síndrome debilitante.El objetivo de este trabajo fue evaluar diferentes técnicas de PCR para la detección de Encephalitozoon intestinalis, E. hellem y E. cuniculi en cultivos celulares infectados con esporas y en muestras de materia fecal (MF).Se realizaron infecciones de la línea celular RK13 con esporas de E.intestinalis, E. hellem o E. cuniculi. Las células infectadas fueron lisadas y las esporas se detectaron por coloración Tricrómica de Weber. La extracción de ADN se realizó de esporas provenientes de cultivo y de MF de individuos sanos previamente inoculadas con esporas. Se evaluó el rendimiento y calidad de ADN (NanoDrop?, Themofisher) de diferentes técnicas de extracción utilizando dos kits comerciales (Qiagen®/Productos Biológicos®), siguiendo los protocolos de los fabricantes o realizando modificaciones. Se evaluó una PCR dirigida contra el ADN ribosomal de varios géneros de microsporidios (PCR panmicrosporidia) y una PCR con primers específicos para E. intestinalis.El mejor rendimiento y calidad de ADN se obtuvo con el kit Qiagen, con modificaciones en incubación a 65°C previo a la lisis y ruptura mecánica con perlas de vidrio. La PCR panmicrosporidia fue eficiente en amplificar una banda de 1200-1300pb (específica de microsporidios) a partir de ADN de los cultivosinfectados y de las heces inoculadas con E. hellem y E. cuniculi. Se obtuvo amplificación de un producto de 930pb específico de E. intestinalis utilizando una PCR especifica a partir de cultivos celulares. Estos resultados demuestran que ambas PCR son buenas candidatas para continuar en su optimización para aplicación en el diagnóstico de microsporidiosis.https://protozoologia.org.ar/congresos-y-reuniones-sap/xxxiii-reunion-anual-sap-2022/Fil: Mena, Cristian Javier. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina.Fil: Mena, Cristian Javier. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigación en Bioquímica Clínica e Inmunología (CIBICI); Argentina.Fil: Silva de Araújo, Ronalda. Universidade Bandeirante de São Paulo. Companhia Ambiental do Estado de São Paulo (CETESB); Brasil.Fil: Burstein, Verónica Liliana. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquimica Clinica; Argentina.Fil: Burstein, Verónica Liliana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigación en Bioquímica Clínica e Inmunología (CIBICI); Argentina.Fil: Guasconi, Lorena. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina.Fil: Guasconi, Lorena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigación en Bioquímica Clínica e Inmunología (CIBICI); Argentina.Fil: Beccacece, Ignacio. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina.Fil: Beccacece, Ignacio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigación en Bioquímica Clínica e Inmunología (CIBICI); Argentina.Fil: Almeida, Mariel. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina.Fil: Almeida, Mariel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigación en Bioquímica Clínica e Inmunología (CIBICI); Argentina.Fil: Bossio, Sabrina Noemi. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas.Fil: Bossio, Sabrina Noemi. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigación en Bioquímica Clínica e Inmunología (CIBICI); Argentina.Fil: Barnes, Andres. 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Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología (CIBICI); Argentina.Enfermedades Infecciosashttps://orcid.org/0000-0003-3578-3087https://orcid.org/0009-0000-0022-9946https://orcid.org/0009-0000-4515-1951https://orcid.org/0009-0007-1090-7094https://orcid.org/0009-0002-2979-8469https://orcid.org/0009-0003-6748-8071https://orcid.org/0000-0002-6789-6118https://orcid.org/0009-0002-4687-6852https://orcid.org/0009-0004-6375-53952022info:eu-repo/semantics/conferenceObjectinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionhttp://purl.org/coar/resource_type/c_5794info:ar-repo/semantics/documentoDeConferenciaapplication/pdfMena, C. et al. (9-10 de noviembre de 2022). Optimización de técnicas de PCR para la detección de los microsporidios Encephalitozoon hellem, E. intestinalis y E. cuniculi en muestras de materia fecal. [Resumen]. XXXIII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología (SAP). 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Fil: Mena, Cristian Javier. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigación en Bioquímica Clínica e Inmunología (CIBICI); Argentina.
Fil: Silva de Araújo, Ronalda. Universidade Bandeirante de São Paulo. Companhia Ambiental do Estado de São Paulo (CETESB); Brasil.
Fil: Burstein, Verónica Liliana. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquimica Clinica; Argentina.
Fil: Burstein, Verónica Liliana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigación en Bioquímica Clínica e Inmunología (CIBICI); Argentina.
Fil: Guasconi, Lorena. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina.
Fil: Guasconi, Lorena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigación en Bioquímica Clínica e Inmunología (CIBICI); Argentina.
Fil: Beccacece, Ignacio. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina.
Fil: Beccacece, Ignacio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigación en Bioquímica Clínica e Inmunología (CIBICI); Argentina.
Fil: Almeida, Mariel. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina.
Fil: Almeida, Mariel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigación en Bioquímica Clínica e Inmunología (CIBICI); Argentina.
Fil: Bossio, Sabrina Noemi. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas.
Fil: Bossio, Sabrina Noemi. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigación en Bioquímica Clínica e Inmunología (CIBICI); Argentina.
Fil: Barnes, Andres. Universidad Nacional de Córdoba.Facultad de Ciencias Médicas; Argentina.
Fil: Barnes, Andres. Córdoba. Gobierno de la Provincia de Córdoba. Ministerio de Salud de la Provincia de Córdoba. Unidad Microbiología del Laboratorio de Diagnóstico del Hospital Rawson; Argentina.
Fil: Cervi, Laura Alejandra. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica; Argentina.
Fil: Cervi, Laura Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigación en Bioquímica Clínica e Inmunología (CIBICI); Argentina.
Fil: Lallo, Maria Anete. Universidade Paulista. Instituto de Ciências da Saúde (ICS); Brasil.
Fil: Chiapello, Laura Silvina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina.
Fil: Chiapello, Laura Silvina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología (CIBICI); Argentina.
Los microsporidios son patógenos oportunistas en individuos inmunocomprometidos, causando diarrea crónica e infecciones diseminadas. Previamente, hemos estandarizado una Nested PCR para la detección de Enterocytozoon bieneusi en heces, la especie más frecuentemente aislada. Sin embargo, especies de Enterocytozoon también pueden causar síndrome debilitante.El objetivo de este trabajo fue evaluar diferentes técnicas de PCR para la detección de Encephalitozoon intestinalis, E. hellem y E. cuniculi en cultivos celulares infectados con esporas y en muestras de materia fecal (MF).Se realizaron infecciones de la línea celular RK13 con esporas de E.intestinalis, E. hellem o E. cuniculi. Las células infectadas fueron lisadas y las esporas se detectaron por coloración Tricrómica de Weber. La extracción de ADN se realizó de esporas provenientes de cultivo y de MF de individuos sanos previamente inoculadas con esporas. Se evaluó el rendimiento y calidad de ADN (NanoDrop?, Themofisher) de diferentes técnicas de extracción utilizando dos kits comerciales (Qiagen®/Productos Biológicos®), siguiendo los protocolos de los fabricantes o realizando modificaciones. Se evaluó una PCR dirigida contra el ADN ribosomal de varios géneros de microsporidios (PCR panmicrosporidia) y una PCR con primers específicos para E. intestinalis.El mejor rendimiento y calidad de ADN se obtuvo con el kit Qiagen, con modificaciones en incubación a 65°C previo a la lisis y ruptura mecánica con perlas de vidrio. La PCR panmicrosporidia fue eficiente en amplificar una banda de 1200-1300pb (específica de microsporidios) a partir de ADN de los cultivosinfectados y de las heces inoculadas con E. hellem y E. cuniculi. Se obtuvo amplificación de un producto de 930pb específico de E. intestinalis utilizando una PCR especifica a partir de cultivos celulares. Estos resultados demuestran que ambas PCR son buenas candidatas para continuar en su optimización para aplicación en el diagnóstico de microsporidiosis.
https://protozoologia.org.ar/congresos-y-reuniones-sap/xxxiii-reunion-anual-sap-2022/
Fil: Mena, Cristian Javier. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina.
Fil: Mena, Cristian Javier. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigación en Bioquímica Clínica e Inmunología (CIBICI); Argentina.
Fil: Silva de Araújo, Ronalda. Universidade Bandeirante de São Paulo. Companhia Ambiental do Estado de São Paulo (CETESB); Brasil.
Fil: Burstein, Verónica Liliana. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquimica Clinica; Argentina.
Fil: Burstein, Verónica Liliana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigación en Bioquímica Clínica e Inmunología (CIBICI); Argentina.
Fil: Guasconi, Lorena. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina.
Fil: Guasconi, Lorena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigación en Bioquímica Clínica e Inmunología (CIBICI); Argentina.
Fil: Beccacece, Ignacio. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina.
Fil: Beccacece, Ignacio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigación en Bioquímica Clínica e Inmunología (CIBICI); Argentina.
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Fil: Almeida, Mariel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigación en Bioquímica Clínica e Inmunología (CIBICI); Argentina.
Fil: Bossio, Sabrina Noemi. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas.
Fil: Bossio, Sabrina Noemi. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigación en Bioquímica Clínica e Inmunología (CIBICI); Argentina.
Fil: Barnes, Andres. Universidad Nacional de Córdoba.Facultad de Ciencias Médicas; Argentina.
Fil: Barnes, Andres. Córdoba. Gobierno de la Provincia de Córdoba. Ministerio de Salud de la Provincia de Córdoba. Unidad Microbiología del Laboratorio de Diagnóstico del Hospital Rawson; Argentina.
Fil: Cervi, Laura Alejandra. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica; Argentina.
Fil: Cervi, Laura Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigación en Bioquímica Clínica e Inmunología (CIBICI); Argentina.
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Fil: Chiapello, Laura Silvina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina.
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