Desarrollo y aplicación de ensayos de ELISA Competitivos con sueros hiperinmunes de gallina para la detección de proteínas lácteas individuales y totales en matrices alimentarias...

Autores
Rocha, Lucía Alejandra; Parreño, Gladys Viviana; Polenta, Gustavo Alberto; Ambrosi, Vanina; Lang, Maria Cecilia
Año de publicación
2026
Idioma
español castellano
Tipo de recurso
documento de conferencia
Estado
versión publicada
Descripción
Póster
La detección precisa de proteínas lácteas (PL) en matrices alimentarias es crucial para el control de calidad y la protección de consumidores con alergias. En este trabajo, presentamos los avances en el desarrollo y la aplicación de ensayos de ELISA Competitivo Indirecto utilizando sueros policlonales de gallina dirigidos contra la α-lactoalbúmina (ALA), β-lactoglobulina (BLG) y β-caseína (BCAS) bovinas. Objetivo: Desarrollar un sistema analítico basado en sueros policlonales de gallina para la detección total e individual de PL y evaluar su desempeño en una matriz alimentaria compleja (galletitas). Metodología: Se hiperinmunizaron 3 grupos de 2 gallinas cada uno con 4 dosis de 30 ug/ dosis de ALA, BLG y CAS, Un cuarto grupo no inmunizado se utilizó como control. Tras la cuarta dosis se evaluó la respuesta de los sueros policlonales frente al antígeno correspondiente, para ello se utilizaron ensayos de tablero de ajedrez (checkboard) para definir las concentraciones óptimas de antígeno inmovilizado en placas de poliestireno de origen nacional (IVEMA) y la dilución del suero de gallina óptimo para cada proteína. Ensayo de Proteínas Totales (PLT): Se desarrolló un ensayo de ELISA competitivo con 0.5 ug/ml de Ag inmovilizado para cada alérgeno, utilizando un pool de sueros policlonales de gallina para la detección de PLT, BCAS, ALA y BLG. Se evaluó el desempeño de los ensayos de BCAS, ALA y BLG para su detección en un sistema modelo (lehce descremada) y en muestras comerciales de galletitas (con y sin leche declarada en su listado de ingredientes), utilizando una solución extractiva comercial. Resultados: Los ensayos individuales desarrollados con los pooles de sueros demostraron sensibilidad y robustez en la matriz modelo (leche descremada), cuantificando las proteínas y obteniendo resultados de 34,4 ng/ml de BCAS, 13 ng/ml de BLG y 20,6 ng/ml de ALA. Los ensayos de BCAS, BLG y ALA fueron capaces de detectar exitosamente la presencia de proteínas en las muestras de galletitas con leche declarada, mientras que las muestras que no la declaraban resultaron negativas, confirmando la viabilidad del sistema en matrices compleja. Conclusiones y Proyecciones: El desarrollo de ELISAS competitivos basados en sueros policlonales de gallina representa una herramienta versátil, sensible y de bajo costo para la detección de proteínas lácteas. Si bien los resultados obtenidos son altamente promisorios, se requiere una validación rigurosa del método frente a un panel más amplio de matrices complejas reales y de contaminantes, incluyendo la determinación de la recuperación y el efecto de matriz. Estos resultados preliminares ya posicionan el sistema como una alternativa con un enorme potencial para su aplicación en la industria alimentaria como un método económico, eficaz, de monitoreo y control de alérgenos. El trabajo futuro incluirá la purificación de la IgY a partir de yema de huevo para estandarizar completamente los ensayos y para el desarrollo de un ELISA sándwich
The accurate detection of dairy proteins (DP) in food matrices is crucial for quality control and the protection of allergic consumers. In this work, we present advances in the development and application of indirect competitive ELISA assays using polyclonal hen sera directed against bovine α-lactalbumin (ALA), β-lactoglobulin (BLG), and β-casein (BCAS). Objective: To develop an analytical system based on polyclonal hen sera for the total and individual detection of DP and to evaluate its performance in a complex food matrix (cookies). Methodology: Three groups of two hens each were hyperimmunized with four doses of 30 µg/dose of ALA, BLG, and CAS. A fourth non-immunized group was used as a control. Following the fourth dose, the response of the polyclonal sera against the corresponding antigen was evaluated. Checkerboard assays were used to determine the optimal concentration of immobilized antigen on domestically manufactured polystyrene plates (IVEMA) as well as the optimal dilution of hen serum for each protein. Total Protein Assay (TDP): A competitive ELISA assay was developed using 0.5 µg/mL of immobilized Ag for each allergen, employing a pool of polyclonal hen sera for the detection of TDP, BCAS, ALA, and BLG. The performance of the BCAS, ALA, and BLG assays was evaluated for their detection in a model system (skim milk) and in commercial cookie samples (with and without milk declared in their ingredient list), using a commercial extraction buffer. Results: The individual assays developed with the serum pools demonstrated sensitivity and robustness in the model matrix (skim milk), successfully quantifying the proteins with results of 34.4 ng/mL for BCAS, 13 ng/mL for BLG, and 20.6 ng/mL for ALA. The BCAS, BLG, and ALA assays were able to successfully detect the presence of proteins in cookie samples with declared milk, whereas samples without declared milk tested negative, confirming the feasibility of the system in complex matrices. Conclusions and Future Prospects: The development of competitive ELISAs based on polyclonal hen sera represents a versatile, sensitive, and low-cost tool for the detection of dairy proteins. While the results obtained are highly promising, rigorous validation of the method against a broader panel of real complex matrices and potential contaminants is required, including the determination of recovery rates and matrix effects. These preliminary results already position the system as an alternative with enormous potential for application in the food industry as an economical and effective method for allergen monitoring and control. Future work will include the purification of IgY from egg yolk to fully standardize the assays and to develop a sandwich ELISA.
Instituto de Virología e Innovaciones Tecnológicas (IVIT)
Fil: Rocha, Lucía Alejandra. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). IncuINTA; Argentina.
Fil: Lang, Maria Cecilia. Vetanco argentina; Argentina.
Fil: Parreño, Gladys Viviana. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). IncuINTA; Argentina.
Fil: Parreño, Gladys Viviana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina.
Fil: Polenta, Gustavo Alberto. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto Tecnología de Alimentos (ITA); Argentina.
Fil: Polenta, Gustavo Alberto. Instituto de Ciencia y Tecnología de Sistemas Alimentarios Sustentables (ICyTeSAS) UEDD INTA CONICET; Argentina.
Fil: Ambrosi, Vanina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto Tecnología de Alimentos (ITA); Argentina.
Fil: Ambrosi, Vanina. Instituto de Ciencia y Tecnología de Sistemas Alimentarios Sustentables (ICyTeSAS) UEDD INTA CONICET; Argentina.
Fuente
VII Congreso Latinoamericano de Ingeniería y Ciencias Aplicadas (CLICAP 26). San Rafael, Mendoza, 18 al 20 de marzo de 2026
Materia
Food Allergies
ELISA
Milk Protein
Process Control
Immune Serum
Hens
Proteins
Food Composition
Alergia Alimentaria
Proteínas de la Leche
Control de Fabricación
Suero Inmune
Gallinas
Proteínas
Composición de los Alimentos
Industrial Control
Control Industrial
Nivel de accesibilidad
acceso abierto
Condiciones de uso
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/
Repositorio
INTA Digital (INTA)
Institución
Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria
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Objetivo: Desarrollar un sistema analítico basado en sueros policlonales de gallina para la detección total e individual de PL y evaluar su desempeño en una matriz alimentaria compleja (galletitas). Metodología: Se hiperinmunizaron 3 grupos de 2 gallinas cada uno con 4 dosis de 30 ug/ dosis de ALA, BLG y CAS, Un cuarto grupo no inmunizado se utilizó como control. Tras la cuarta dosis se evaluó la respuesta de los sueros policlonales frente al antígeno correspondiente, para ello se utilizaron ensayos de tablero de ajedrez (checkboard) para definir las concentraciones óptimas de antígeno inmovilizado en placas de poliestireno de origen nacional (IVEMA) y la dilución del suero de gallina óptimo para cada proteína. Ensayo de Proteínas Totales (PLT): Se desarrolló un ensayo de ELISA competitivo con 0.5 ug/ml de Ag inmovilizado para cada alérgeno, utilizando un pool de sueros policlonales de gallina para la detección de PLT, BCAS, ALA y BLG. Se evaluó el desempeño de los ensayos de BCAS, ALA y BLG para su detección en un sistema modelo (lehce descremada) y en muestras comerciales de galletitas (con y sin leche declarada en su listado de ingredientes), utilizando una solución extractiva comercial. Resultados: Los ensayos individuales desarrollados con los pooles de sueros demostraron sensibilidad y robustez en la matriz modelo (leche descremada), cuantificando las proteínas y obteniendo resultados de 34,4 ng/ml de BCAS, 13 ng/ml de BLG y 20,6 ng/ml de ALA. Los ensayos de BCAS, BLG y ALA fueron capaces de detectar exitosamente la presencia de proteínas en las muestras de galletitas con leche declarada, mientras que las muestras que no la declaraban resultaron negativas, confirmando la viabilidad del sistema en matrices compleja. Conclusiones y Proyecciones: El desarrollo de ELISAS competitivos basados en sueros policlonales de gallina representa una herramienta versátil, sensible y de bajo costo para la detección de proteínas lácteas. Si bien los resultados obtenidos son altamente promisorios, se requiere una validación rigurosa del método frente a un panel más amplio de matrices complejas reales y de contaminantes, incluyendo la determinación de la recuperación y el efecto de matriz. Estos resultados preliminares ya posicionan el sistema como una alternativa con un enorme potencial para su aplicación en la industria alimentaria como un método económico, eficaz, de monitoreo y control de alérgenos. El trabajo futuro incluirá la purificación de la IgY a partir de yema de huevo para estandarizar completamente los ensayos y para el desarrollo de un ELISA sándwichThe accurate detection of dairy proteins (DP) in food matrices is crucial for quality control and the protection of allergic consumers. In this work, we present advances in the development and application of indirect competitive ELISA assays using polyclonal hen sera directed against bovine α-lactalbumin (ALA), β-lactoglobulin (BLG), and β-casein (BCAS). Objective: To develop an analytical system based on polyclonal hen sera for the total and individual detection of DP and to evaluate its performance in a complex food matrix (cookies). Methodology: Three groups of two hens each were hyperimmunized with four doses of 30 µg/dose of ALA, BLG, and CAS. A fourth non-immunized group was used as a control. Following the fourth dose, the response of the polyclonal sera against the corresponding antigen was evaluated. Checkerboard assays were used to determine the optimal concentration of immobilized antigen on domestically manufactured polystyrene plates (IVEMA) as well as the optimal dilution of hen serum for each protein. Total Protein Assay (TDP): A competitive ELISA assay was developed using 0.5 µg/mL of immobilized Ag for each allergen, employing a pool of polyclonal hen sera for the detection of TDP, BCAS, ALA, and BLG. The performance of the BCAS, ALA, and BLG assays was evaluated for their detection in a model system (skim milk) and in commercial cookie samples (with and without milk declared in their ingredient list), using a commercial extraction buffer. Results: The individual assays developed with the serum pools demonstrated sensitivity and robustness in the model matrix (skim milk), successfully quantifying the proteins with results of 34.4 ng/mL for BCAS, 13 ng/mL for BLG, and 20.6 ng/mL for ALA. The BCAS, BLG, and ALA assays were able to successfully detect the presence of proteins in cookie samples with declared milk, whereas samples without declared milk tested negative, confirming the feasibility of the system in complex matrices. Conclusions and Future Prospects: The development of competitive ELISAs based on polyclonal hen sera represents a versatile, sensitive, and low-cost tool for the detection of dairy proteins. While the results obtained are highly promising, rigorous validation of the method against a broader panel of real complex matrices and potential contaminants is required, including the determination of recovery rates and matrix effects. These preliminary results already position the system as an alternative with enormous potential for application in the food industry as an economical and effective method for allergen monitoring and control. Future work will include the purification of IgY from egg yolk to fully standardize the assays and to develop a sandwich ELISA.Instituto de Virología e Innovaciones Tecnológicas (IVIT)Fil: Rocha, Lucía Alejandra. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). IncuINTA; Argentina.Fil: Lang, Maria Cecilia. 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Instituto de Ciencia y Tecnología de Sistemas Alimentarios Sustentables (ICyTeSAS) UEDD INTA CONICET; Argentina.Facultad de Ciencias Aplicadas a la Industria, Universidad Nacional de Cuyo2026-09-02T12:47:50Z2026-09-02T12:47:50Z2026-03info:eu-repo/semantics/conferenceObjectinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionhttp://purl.org/coar/resource_type/c_5794info:ar-repo/semantics/documentoDeConferenciaapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/20.500.12123/27614VII Congreso Latinoamericano de Ingeniería y Ciencias Aplicadas (CLICAP 26). San Rafael, Mendoza, 18 al 20 de marzo de 2026reponame:INTA Digital (INTA)instname:Instituto Nacional de Tecnología Agropecuariaspainfo:eu-repograntAgreement/INTA/2023-PE-L04-I120, Inocuidad física, química y biológica de los alimentos. 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La detección precisa de proteínas lácteas (PL) en matrices alimentarias es crucial para el control de calidad y la protección de consumidores con alergias. En este trabajo, presentamos los avances en el desarrollo y la aplicación de ensayos de ELISA Competitivo Indirecto utilizando sueros policlonales de gallina dirigidos contra la α-lactoalbúmina (ALA), β-lactoglobulina (BLG) y β-caseína (BCAS) bovinas. Objetivo: Desarrollar un sistema analítico basado en sueros policlonales de gallina para la detección total e individual de PL y evaluar su desempeño en una matriz alimentaria compleja (galletitas). Metodología: Se hiperinmunizaron 3 grupos de 2 gallinas cada uno con 4 dosis de 30 ug/ dosis de ALA, BLG y CAS, Un cuarto grupo no inmunizado se utilizó como control. Tras la cuarta dosis se evaluó la respuesta de los sueros policlonales frente al antígeno correspondiente, para ello se utilizaron ensayos de tablero de ajedrez (checkboard) para definir las concentraciones óptimas de antígeno inmovilizado en placas de poliestireno de origen nacional (IVEMA) y la dilución del suero de gallina óptimo para cada proteína. Ensayo de Proteínas Totales (PLT): Se desarrolló un ensayo de ELISA competitivo con 0.5 ug/ml de Ag inmovilizado para cada alérgeno, utilizando un pool de sueros policlonales de gallina para la detección de PLT, BCAS, ALA y BLG. Se evaluó el desempeño de los ensayos de BCAS, ALA y BLG para su detección en un sistema modelo (lehce descremada) y en muestras comerciales de galletitas (con y sin leche declarada en su listado de ingredientes), utilizando una solución extractiva comercial. Resultados: Los ensayos individuales desarrollados con los pooles de sueros demostraron sensibilidad y robustez en la matriz modelo (leche descremada), cuantificando las proteínas y obteniendo resultados de 34,4 ng/ml de BCAS, 13 ng/ml de BLG y 20,6 ng/ml de ALA. Los ensayos de BCAS, BLG y ALA fueron capaces de detectar exitosamente la presencia de proteínas en las muestras de galletitas con leche declarada, mientras que las muestras que no la declaraban resultaron negativas, confirmando la viabilidad del sistema en matrices compleja. Conclusiones y Proyecciones: El desarrollo de ELISAS competitivos basados en sueros policlonales de gallina representa una herramienta versátil, sensible y de bajo costo para la detección de proteínas lácteas. Si bien los resultados obtenidos son altamente promisorios, se requiere una validación rigurosa del método frente a un panel más amplio de matrices complejas reales y de contaminantes, incluyendo la determinación de la recuperación y el efecto de matriz. Estos resultados preliminares ya posicionan el sistema como una alternativa con un enorme potencial para su aplicación en la industria alimentaria como un método económico, eficaz, de monitoreo y control de alérgenos. El trabajo futuro incluirá la purificación de la IgY a partir de yema de huevo para estandarizar completamente los ensayos y para el desarrollo de un ELISA sándwich
The accurate detection of dairy proteins (DP) in food matrices is crucial for quality control and the protection of allergic consumers. In this work, we present advances in the development and application of indirect competitive ELISA assays using polyclonal hen sera directed against bovine α-lactalbumin (ALA), β-lactoglobulin (BLG), and β-casein (BCAS). Objective: To develop an analytical system based on polyclonal hen sera for the total and individual detection of DP and to evaluate its performance in a complex food matrix (cookies). Methodology: Three groups of two hens each were hyperimmunized with four doses of 30 µg/dose of ALA, BLG, and CAS. A fourth non-immunized group was used as a control. Following the fourth dose, the response of the polyclonal sera against the corresponding antigen was evaluated. Checkerboard assays were used to determine the optimal concentration of immobilized antigen on domestically manufactured polystyrene plates (IVEMA) as well as the optimal dilution of hen serum for each protein. Total Protein Assay (TDP): A competitive ELISA assay was developed using 0.5 µg/mL of immobilized Ag for each allergen, employing a pool of polyclonal hen sera for the detection of TDP, BCAS, ALA, and BLG. The performance of the BCAS, ALA, and BLG assays was evaluated for their detection in a model system (skim milk) and in commercial cookie samples (with and without milk declared in their ingredient list), using a commercial extraction buffer. Results: The individual assays developed with the serum pools demonstrated sensitivity and robustness in the model matrix (skim milk), successfully quantifying the proteins with results of 34.4 ng/mL for BCAS, 13 ng/mL for BLG, and 20.6 ng/mL for ALA. The BCAS, BLG, and ALA assays were able to successfully detect the presence of proteins in cookie samples with declared milk, whereas samples without declared milk tested negative, confirming the feasibility of the system in complex matrices. Conclusions and Future Prospects: The development of competitive ELISAs based on polyclonal hen sera represents a versatile, sensitive, and low-cost tool for the detection of dairy proteins. While the results obtained are highly promising, rigorous validation of the method against a broader panel of real complex matrices and potential contaminants is required, including the determination of recovery rates and matrix effects. These preliminary results already position the system as an alternative with enormous potential for application in the food industry as an economical and effective method for allergen monitoring and control. Future work will include the purification of IgY from egg yolk to fully standardize the assays and to develop a sandwich ELISA.
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Fil: Parreño, Gladys Viviana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina.
Fil: Polenta, Gustavo Alberto. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto Tecnología de Alimentos (ITA); Argentina.
Fil: Polenta, Gustavo Alberto. Instituto de Ciencia y Tecnología de Sistemas Alimentarios Sustentables (ICyTeSAS) UEDD INTA CONICET; Argentina.
Fil: Ambrosi, Vanina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto Tecnología de Alimentos (ITA); Argentina.
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